动物组织中二恶英检测前需要进行哪些样品预处理步骤

二恶英是一类具有强毒性的持久性有机污染物，通过食物链富集于动物组织（如肌肉、肝脏、脂肪），其检测是评估食品安全与环境风险的关键。而样品预处理作为二恶英检测的核心前置环节，需从复杂基质中提取目标物、去除脂肪及干扰物并实现富集，直接决定后续分析的准确性。本文系统拆解动物组织二恶英检测前的预处理步骤，详细阐述各环节的操作要点与注意事项。

样品采集与初始保存

动物组织采样需保证代表性：肉类样品应混合肌肉（背部、腿部）、肝脏、皮下脂肪等部位，避免单一部位偏差——二恶英脂溶性强，脂肪含量高的部位（如皮下脂肪）浓度更高。采样工具需用玻璃或不锈钢（禁用塑料，避免增塑剂干扰），采样后立即分装为2-5g小份，快速冷冻至-20℃以下（长期保存需-80℃），全程避免反复解冻-冷冻（防止脂肪氧化产生干扰物）。运输时用干冰保持低温，防止样品变质。

容器需提前清洁：玻璃容器用重铬酸钾洗液浸泡24小时，去离子水冲洗3次，马弗炉450℃灼烧2小时；不锈钢工具用丙酮超声清洗3次，自然晾干后使用，避免残留有机物影响检测。

样品均质化与内标添加

均质化目的是打破细胞结构，使样品均匀以提高提取效率。新鲜或冷冻组织需冷冻研磨：-80℃预冷2小时后，用不锈钢研磨机粉碎，相较于常温绞碎，可避免组织汁液流失与脂肪氧化。研磨后过40目筛，确保颗粒直径<0.42mm，保证溶剂与样品充分接触。

内标添加是定量关键：向均质样品中加入13C标记的二恶英同系物（如13C-2,3,7,8-TCDD），浓度与预计目标物匹配（通常10-50pg/g）。内标需与目标物性质相似，校正提取、净化中的损失。添加后用玻璃棒或涡旋混合器充分搅拌，确保均匀分布。

脂肪含量测定与提取溶剂选择

动物组织脂肪含量直接影响提取效率与结果表达（二恶英浓度以“pg/g脂肪”为单位），需用索氏提取法测定：取5g均质样品，滤纸包裹后放入索氏提取器，加150mL正己烷回流提取8小时，收集提取液旋转蒸发至干，称量脂肪残渣计算含量（脂肪含量=脂肪重量/样品重量×100%）。

提取溶剂选正己烷-二氯甲烷（1:1）混合液：正己烷溶解脂肪能力强，二氯甲烷增强极性稍强的二恶英（如多氯代二苯并呋喃）提取效率。溶剂需重蒸纯化或用色谱纯级，避免引入新干扰物。

目标物提取：常用方法与操作要点

索氏提取适用于批量处理：将含内标的均质样品用滤纸包裹，放入索氏提取器，加100mL混合溶剂回流16-24小时（脂肪含量>20%需延长至24小时）。提取效率高但耗时久，结束后将提取液转移至圆底烧瓶待处理。

加压流体提取（PFE）快速高效：样品装入10-30mL不锈钢萃取池，加混合溶剂，设置温度100-120℃、压力1500-2000psi、静态提取5分钟，循环2次。溶剂用量仅20-30mL，30分钟完成提取，但设备成本较高。

微波辅助提取（MAE）适用于含水分组织（如肝脏）：样品加50mL混合溶剂放入微波罐，80-90℃、300W提取30分钟。速度快但需控温——温度过高会导致脂肪分解产生干扰物。提取后冷却过滤，收集提取液。

提取液的除水与过滤

提取液含少量水分（样品或溶剂残留），会降低净化柱效率，需除水：加提取液体积1/5的无水硫酸钠（450℃灼烧4小时除有机物），搅拌5分钟静置30分钟，充分吸收水分。

除水后用定性滤纸或0.45μm有机相滤膜过滤，去除样品残渣与多余无水硫酸钠。过滤液转移至干净圆底烧瓶，准备净化处理。

净化处理：去脂与干扰物去除

硅胶柱净化是常用去脂方法：取10g活化硅胶（130℃烘12小时），用正己烷湿法装柱（柱长20cm、内径1cm），确保无气泡。提取液缓慢上柱，液面降至硅胶表面时，用50mL正己烷淋洗（1-2滴/秒），去除未吸附的脂肪与弱极性干扰物；随后用80mL正己烷-二氯甲烷（3:1）洗脱，收集含二恶英的洗脱液。

凝胶渗透色谱（GPC）去除大分子脂肪：用聚苯乙烯-二乙烯基苯柱，流动相为环己烷-乙酸乙酯（1:1），流速1.5mL/min。注入提取液后，收集15-30分钟馏分（需用标准品预确定二恶英保留时间），此馏分不含大分子脂肪，仅含小分子二恶英与少量干扰物。

活性炭柱富集二恶英：将GPC馏液加入活性炭-中性氧化铝混合柱（2g活性炭+3g氧化铝），用50mL正己烷淋洗去除极性干扰物（酚类、酯类）；再用60mL二氯甲烷-甲苯（1:1）洗脱，收集高纯度二恶英馏分。

浓缩与定容

净化后的洗脱液需浓缩提高浓度：转移至圆底烧瓶，用旋转蒸发器浓缩——水浴温度35-40℃、真空度0.08-0.1MPa，旋转至体积1-2mL（避免蒸干，防止二恶英损失）。

浓缩液转移至2mL进样瓶，用氮吹仪（氮气纯度≥99.999%）浓缩至0.5-1mL，控制气流速度（液面微沸为宜），避免气流过大吹走二恶英。最后用正己烷定容至1mL，密封后4℃冷藏，待高分辨气相色谱-高分辨质谱（HRGC-HRMS）分析。