二恶英检测方法验证参数及可接受标准范围

二恶英类化合物（PCDD/Fs）作为持久性有机污染物（POPs）的典型代表，具有高毒性、难降解、生物蓄积性等特点，其环境与食品中的残留量检测直接关系到公众健康与生态安全。为确保检测结果的准确性与可靠性，实验室需通过方法验证确认检测方法的适用性——这一过程需围绕线性范围、检出限、回收率、精密度等核心参数展开，每个参数均需满足明确的可接受标准。本文将系统梳理二恶英检测方法验证的关键参数及对应的标准范围，为实验室方法确认提供实操指引。

线性范围与相关系数的验证逻辑及标准

线性范围是检测方法对目标物浓度与响应值线性关系的覆盖区间，直接影响不同浓度样品的定量能力。二恶英检测中，线性范围需覆盖样品可能的浓度区间，通常以定量限（LOQ）为起点，设置至少5个浓度点（如LOQ、2×LOQ、5×LOQ、10×LOQ、20×LOQ），每个点重复测定3次以减少误差。

相关系数（r）是评估线性关系的核心指标，反映浓度与响应值的关联程度。对于二恶英的色谱-质谱检测（如HRGC-HRMS），可接受标准为r≥0.995——若r<0.995，需重新调整浓度点或排查实验误差（如标准溶液配制、仪器响应稳定性）。此外，线性范围上限需避免仪器响应饱和，通常不超过仪器最大线性响应的80%。

例如，某实验室用ID-HRGC-HRMS检测土壤二恶英，线性范围设为0.1 pg/mL（LOQ）至20 pg/mL，5个浓度点的r均达0.998以上，符合可接受标准。

检出限与定量限的确定及可接受标准

检出限（LOD）是方法能可靠检测的最低浓度，定量限（LOQ）是能准确定量的最低浓度，均需通过实际实验验证。二恶英检测中，LOD通常为信噪比（S/N）=3时的浓度，LOQ为S/N=10时的浓度。

可接受标准需结合法规要求：LOD需低于法规限量（如欧盟食品限量0.5 pg TEQ/g，LOD需≤0.1 pg TEQ/g）；LOQ需低于样品最低预期浓度（如土壤背景值0.05 pg TEQ/g，LOQ需≤0.05 pg TEQ/g）。需注意，LOD与LOQ不能仅靠理论计算，需通过连续注射低浓度标液验证。

例如，某实验室检测水质二恶英，连续注射7次0.05 pg/mL标液，S/N均值4.2，LOD=0.036 pg/mL；S/N=10时LOQ=0.086 pg/mL，均低于《地表水环境质量标准》限量（0.1 pg/mL），符合要求。

回收率的评估与可接受范围

回收率反映检测全过程的效率，通过加标回收试验测定——向空白样品加标后，计算测得浓度与加标浓度的比值。二恶英检测中，回收率范围需按加标浓度调整：高浓度（10×LOQ以上）为70%-120%，低浓度（LOQ至5×LOQ）可放宽至60%-130%。

同位素稀释法（ID）中，需用同位素内标回收率评估——¹³C标记内标的回收率需在80%-120%之间，以抵消基体效应。例如，检测牛奶二恶英时，0.2 pg TEQ/g（2×LOQ）加标回收率65%-125%可接受，2 pg TEQ/g（10×LOQ）需严格控制在70%-120%。

若回收率在范围内但精密度差，需检查操作重复性；若精密度好但回收率低，需优化提取或净化步骤（如增加溶剂体积、更换净化柱）。

精密度的验证与RSD控制标准

精密度反映重复测定的稳定性，包括日内（同批次一天内）与日间（不同批次多天）精密度，用相对标准偏差（RSD）表示。二恶英检测中，日内RSD≤15%、日间RSD≤20%为可接受；低浓度样品可放宽至日内RSD≤20%、日间RSD≤25%。

例如，检测土壤二恶英，日内5次重复RSD=12%，日间3天RSD=18%，符合标准；低浓度（0.05 pg TEQ/g）日内RSD=19%，虽超15%但在20%放宽范围内，视为合格。

精密度需与回收率结合评估——若回收率合格但精密度差，需排查前处理一致性（如提取时间、净化柱装填）；若精密度好但回收率低，需优化前处理步骤。

基体效应的评估与控制标准

基体效应是共存物质对检测的干扰（增强或抑制），需通过同位素内标法控制并评估。评估方法为计算“基质样品加标回收率”与“纯溶剂加标回收率”的比值：90%-110%为可忽略，80%-120%需优化净化（如增加硅胶柱次数、用GPC除脂肪），超出则需换方法。

例如，检测肉类二恶英，纯溶剂回收率95%，基质样品回收率88%，比值92.6%，基体效应小；若基质回收率75%，比值78.9%，需增加硅胶柱净化，将回收率提至85%，比值89.5%，符合要求。

复杂基质（如食品、土壤）易出现基体效应，实验室需针对不同基质建立专属净化方法，确保效应在可接受范围。

平行样重复性的验证要求

平行样重复性反映同一批次样品检测的一致性，需从“前处理”开始独立操作（分别称样、提取、净化），计算平行样结果的RSD。

可接受标准：RSD≤15%；低浓度样品放宽至≤20%。例如，检测蔬菜二恶英，平行样浓度0.062与0.068 pg TEQ/g，RSD=4.8%，符合标准；低浓度0.045与0.053 pg TEQ/g，RSD=8.7%，在范围内。

若平行样RSD>20%，需检查前处理一致性（如称样误差、提取时间差异、净化柱松紧），确保操作步骤统一。

标准物质的溯源性要求

标准物质溯源性是结果准确的基础，二恶英检测需使用“有证标准物质（CRM）”——由权威机构（如EPA、JRC、中国计量院）发布，具有明确溯源性、不确定度与认证值。

可接受要求：（1）基体与样品一致（如食品检测用食品基体CRM）；（2）浓度覆盖样品预期范围；（3）在有效期内；（4）标准溶液配制需记录溯源链（如稀释步骤、量具校准证书）。

例如，检测土壤二恶英用EPA的SRM 1944（土壤基体，认证值0.12±0.02 pg TEQ/g），稀释用校准移液管（证书2023-C-012）与容量瓶（2023-V-008），确保溯源性。非有证标准物质不得用于方法验证，因其缺乏溯源性。

稳定性的验证与可接受标准

稳定性包括标准溶液与样品稳定性，确保检测周期内浓度无显著变化。标准溶液通常-20℃保存，样品需冷冻（-20℃）或冷藏（4℃），具体依基体调整。

标准溶液稳定性：定期（1、3、6个月）测浓度，变化≤10%为稳定。例如，10 pg/mL标液-20℃保存6个月，浓度9.2 pg/mL，变化8%，符合要求；12个月后8.5 pg/mL，变化15%，需重新配制。

样品稳定性：保存一段时间（7、14、30天）后测浓度，变化≤15%为稳定。例如，牛奶-20℃保存30天，浓度从0.12变为0.11 pg TEQ/g，变化8.3%，符合标准；60天后0.09 pg TEQ/g，变化25%，需缩短保存时间至14天内。

稳定性需在方法验证时完成，日常检测中定期核查（每6个月验证标液，每季度验证样品），确保结果可靠。