透皮吸收测试中 Franz 扩散池法的操作步骤是什么

Franz扩散池法是透皮吸收研究中最经典的体外评价方法，广泛用于外用药物、化妆品活性成分的透皮性能验证。其原理是通过模拟皮肤屏障（如离体皮肤），观察供体池中的药物透过皮肤进入接收池的过程，定量分析透皮速率与累积透过量。该方法操作标准化、结果重复性好，是行业内评估透皮有效性的核心手段。

实验前的准备工作

首先确定接收液：需满足“漏槽条件”（药物溶解度远大于透皮量），常用磷酸盐缓冲液（PBS，pH7.4，模拟人体皮肤pH）或生理盐水，脂溶性药物可加≤10%乙醇提高溶解度。接收液需用0.22μm滤膜过滤除菌，避免微生物干扰。

器材检查：Franz扩散池（供体池+接收池）需无裂缝，搅拌子清洁无残留；恒温水浴预调至32℃（人体皮肤温度），温度波动≤0.5℃；准备取样器、分光光度计或HPLC等检测仪器。

皮肤样品处理：常用SD大鼠背部皮肤或人尸体皮，新鲜或-20℃冻存（≤1个月）。使用前脱毛（电动剃毛器，避免损伤表皮），去除皮下脂肪，用32℃生理盐水漂洗3次，去除血迹杂质。

扩散池的组装与调试

向接收池加32℃接收液：液面没过“扩散界面”（皮肤放置处），避免气泡——气泡会阻挡药物扩散，可用注射器吸出或轻敲池壁排出。

放入搅拌子，启动搅拌器：转速300-500rpm（验证方法：加荧光素钠，1分钟内均匀则合适）。转速过低导致接收液不均，过高易破坏皮肤结构。

固定皮肤：表皮朝上（朝供体池）、真皮朝下（朝接收池），平铺于接收池接口，盖供体池用夹子固定。检查皮肤无褶皱/拉伸——褶皱会让透皮路径不均，拉伸会破坏屏障。

验证密封性：缝隙涂少量水，若吸水或冒泡，说明密封不严，需重新拧紧或换密封垫。

供试品添加与系统平衡

供试品制备：乳膏/凝胶搅拌至无颗粒，溶液用0.45μm滤膜过滤。用移液管加至供体池，均匀覆盖皮肤（面积与有效透皮面积一致，通常1-2cm²）。

体积控制：供体池加1-2ml（容量2-5ml），过多易溢出，过少易干涸。挥发性制剂（如酊剂）需盖石蜡膜防蒸发。

系统平衡：加供试品后静置30-60分钟（动物皮30分钟，人皮60分钟），让皮肤充分水合——水合后的皮肤角质层膨胀，透皮速率更接近人体实际。平衡时保持水浴与搅拌开启。

透皮实验的正式进行

平衡结束记0时刻，设置取样点：常用1、2、4、6、8、12、24小时（快速透皮可缩短至30分钟，缓慢透皮延长至48小时）。

取样操作：用1ml注射器从接收池取样口抽1ml，立即补1ml新鲜32℃接收液（维持体积恒定）。补加液需与原接收液一致，保证“漏槽条件”。

注意事项：针头插接收液中下层（避气泡），慢抽防吸搅拌子；取样后封取样口，样品标记时间编号，4℃保存防降解。

样品处理与定量分析

样品预处理：室温解冻后，0.22μm滤膜过滤（去皮肤碎屑/微生物）。紫外检测需稀释至吸光度0.2-0.8（线性最佳），HPLC检测转进样瓶。

标准曲线：用接收液配0.1、0.5、1、5、10μg/ml标准品，测吸光度/峰面积，绘标准曲线（R²≥0.999）。

定量计算：根据标准曲线得样品浓度（Ci），累积透过量Qn=(Cn×V)+Σ(Ci×Vi)（V接收池体积，Vi取样体积）。透皮速率（J）取曲线线性部分斜率÷有效面积，单位μg/(cm²·h)。

重复性验证：做3次平行实验，相对标准偏差（RSD）≤10%，否则重新实验。

实验后的清洁维护

拆卸扩散池：倒出残留供试品，去离子水冲3次，75%乙醇泡30分钟消毒，60℃以下烘干（防塑料变形）。

搅拌子清洁：洗洁精去残留，去离子水冲，丙酮泡5分钟（去脂溶性残留），晾干。

仪器维护：水浴倒空擦净，搅拌机关电源擦水迹，检测仪器按规程关机清理进样口。

常见问题排查

气泡问题：接收池有气泡会挡药物，需重新加接收液或吸气泡；实验中冒泡则换皮肤。

皮肤破损：安装前用手电筒照，透光点说明破损，需换皮肤——破损会让透皮速率异常高。

浓度不均：搅拌转速低导致，提高至500rpm，或换大搅拌子。

供试品干涸：水性品盖石蜡膜，油性品加体积至2ml，或缩短实验时间。