一次性塑料餐具检测中微生物指标的检测方法与合格标准

一次性塑料餐具作为高频食品接触材料，广泛应用于餐饮外卖、快餐等场景，其微生物污染情况直接关联食品安全。微生物指标是评估其卫生质量的核心依据，涵盖菌落总数、大肠菌群及致病菌（沙门氏菌、志贺氏菌、金黄色葡萄球菌等），准确的检测方法与严格的合格标准是保障餐具安全使用的关键。本文围绕一次性塑料餐具微生物检测的样品处理、各指标检测方法及合格标准、检测关键控制要点展开说明。

一次性塑料餐具微生物检测的样品处理要求

样品处理是微生物检测的前提，需遵循GB 4789.1-2020《食品安全国家标准 食品微生物学检验 总则》的“代表性”原则：同一生产批次、同一规格产品中，随机选取5-10个独立包装样品，覆盖不同包装单元与生产时段。采样时用无菌镊子、剪刀操作，避免手直接接触样品表面，将样品装入无菌容器密封。

样品制备需在100级无菌室或超净工作台内进行：将采集的餐具剪碎（每块约0.5cm×0.5cm），混合均匀后称取25g，加入225mL无菌生理盐水（0.85%氯化钠溶液），用无菌震荡器（200-300r/min）处理2-3分钟，制成1:10样液。若样品质地较硬（如餐盒），可延长震荡时间至5分钟，确保样液均匀。

样液需梯度稀释（10⁻¹、10⁻²、10⁻³等），稀释时用无菌移液器或一次性吸管，每换一个稀释度更换吸管。稀释后的样液需30分钟内接种，避免微生物死亡或繁殖影响结果。同时设置空白对照：取225mL无菌生理盐水按相同流程处理，验证试剂与操作的无菌性，若空白出现菌落需重新采样。

菌落总数的检测方法与合格标准

菌落总数反映餐具整体微生物污染水平，检测依据GB 4789.2-2022《食品安全国家标准 食品微生物学检验 菌落总数测定》。取1mL不同稀释度的样液注入无菌平皿，立即倒入15mL融化并冷却至46℃的营养琼脂培养基（pH 7.2±0.2），轻轻旋转混匀，待凝固后倒置，放入36±1℃培养箱培养48±2小时。

培养结束后，选择菌落数在30-300之间的平皿计数。若所有稀释度菌落数均超300，取最高稀释度平均菌落数×稀释倍数；若均低于30，取最低稀释度平均菌落数×稀释倍数。计数时需区分细菌菌落与培养基杂质，链状菌落（无明显界限）按单个计数。

合格标准依据GB 4806.7-2016《食品安全国家标准 食品接触用塑料材料及制品》：一次性塑料餐具菌落总数需≤1000 CFU/g（或CFU/mL）。若结果超标，说明餐具受微生物污染较严重，可能来自生产环境（如车间空气、设备）或包装储存环节（如未密封导致空气中微生物附着）。

大肠菌群的检测方法与合格标准

大肠菌群是粪便污染的指示菌，检测依据GB 4789.3-2022《食品安全国家标准 食品微生物学检验 大肠菌群计数》，常用MPN（最大概率数）法。取1mL样液接种到乳糖胆盐发酵管（每管10mL），每个稀释度做3个平行，36±1℃培养24±2小时。若发酵管产酸（变黄）、产气（小倒管有气泡），即为初发酵阳性。

将阳性发酵管中的培养物转种到伊红美蓝琼脂平板，36±1℃培养18-24小时，观察典型菌落（深紫色带金属光泽、紫黑色或淡紫色）。挑取典型菌落做革兰氏染色（革兰氏阴性无芽胞杆菌）和复发酵试验（接种乳糖发酵管，36±1℃培养24±2小时），复发酵阳性则判定为大肠菌群阳性。

合格标准依据GB 4806.7-2016：一次性塑料餐具大肠菌群需≤3 MPN/100g（或CFU/100g），且不得检出大肠埃希氏菌。若结果超标，说明餐具可能接触过粪便或肠道分泌物，存在肠道致病菌污染风险（如沙门氏菌、志贺氏菌）。

致病菌（沙门氏菌、志贺氏菌、金黄色葡萄球菌）的检测方法与合格标准

致病菌是一次性塑料餐具的“必检项”，检测依据分别为GB 4789.4（沙门氏菌）、GB 4789.5（志贺氏菌）、GB 4789.10（金黄色葡萄球菌）。

沙门氏菌检测：取25g样液加入225mL缓冲蛋白胨水，36±1℃预增菌8-18小时；取1mL预增菌液加入10mL四硫磺酸钠煌绿增菌液，42±1℃选择性增菌18-24小时。将增菌液接种到SS琼脂平板，36±1℃培养18-24小时，挑取无色透明/微黄色、中心黑色的典型菌落，做三糖铁琼脂试验（斜面红、底层黄、产硫化氢）和血清学鉴定，符合特征则为阳性。

志贺氏菌检测：取25g样液加入225mL革兰氏阴性菌增菌液，36±1℃增菌6-8小时；转种到麦康凯琼脂平板，36±1℃培养18-24小时，挑取无色透明的典型菌落，做三糖铁琼脂试验（斜面红、底层黄、不产硫化氢）和血清学鉴定，符合特征则为阳性。

金黄色葡萄球菌检测：取25g样液加入225mL7.5%氯化钠肉汤，36±1℃增菌18-24小时；转种到Baird-Parker琼脂平板，36±1℃培养24-48小时，挑取圆形、光滑、黑色且周围有透明圈的典型菌落，做革兰氏染色（阳性球菌呈葡萄状排列）和血浆凝固酶试验（与兔血浆混合后凝固），两项阳性则为阳性。

合格标准依据GB 4806.7-2016：三类致病菌均需≤0 CFU/25g（即不得检出）。若检出任一致病菌，说明餐具受严重污染，需立即召回并排查生产环节（如原料污染、车间消毒不彻底、人员操作不当）。

检测过程中的无菌操作要点

无菌操作贯穿检测全程：采样时用无菌工具，样品装入无菌容器，2小时内送检（无法及时送检需4℃冷藏）。样品处理前，超净工作台需开启紫外灯30分钟消毒，台面用75%乙醇擦拭；操作人员戴无菌手套，用75%乙醇消毒双手，避免汗液或手上微生物污染样品。

接种时，移液器吸头或吸管需高压灭菌（121℃，15分钟），每接种一个样品更换一次；培养皿需倒置培养，防止冷凝水冲散菌落。检测结束后，用过的工具（剪刀、吸头）需高压灭菌，避免污染环境。若空白平板出现菌落，需立即验证试剂与环境，重新检测。

培养基与试剂的选择及质量控制

培养基需选符合国家标准的产品：菌落总数用营养琼脂（GB 4789.2），外观淡黄色、溶解后澄清，pH 7.2±0.2；大肠菌群用乳糖胆盐发酵管（含溴甲酚紫指示剂）、伊红美蓝琼脂（含伊红与美蓝染料）；致病菌用缓冲蛋白胨水（预增菌）、四硫磺酸钠煌绿增菌液（选择性增菌）、SS琼脂（分离沙门氏菌）、Baird-Parker琼脂（分离金黄色葡萄球菌）。

试剂需严格质量控制：无菌生理盐水用蒸馏水配制（0.85%），高压灭菌后无杂菌；增菌液与分离培养基需做无菌验证（灭菌后倒入平板，36±1℃培养24小时无菌落）。若使用商品化试剂，需检查有效期与批号，确保在保质期内。

培养条件的控制要求

培养条件直接影响微生物生长：温度需稳定，菌落总数、大肠菌群、致病菌均需36±1℃（沙门氏菌选择性增菌需42±1℃），培养箱需提前预热，用温度计校准（误差≤±0.5℃）。时间需精准：菌落总数培养48±2小时，大肠菌群初发酵24±2小时、复发酵24±2小时，致病菌增菌18-24小时。

湿度需控制在40%-60%，培养箱内可放一盆水增加湿度；平板需倒置摆放，避免堆叠（堆叠会导致温度不均）。培养结束后，需及时观察结果，避免延长培养时间导致杂菌过度生长，影响菌落计数与典型菌落识别。