如何解决微生物限度检测中控制菌检测出现假阳性结果的问题

微生物限度检测中的控制菌检测是评估药品、食品等产品微生物安全性的核心环节，其结果直接影响产品合规性判定。然而，假阳性结果（检测到非样品本身携带的目标菌）会导致误判，浪费资源甚至引发产品信任危机。本文结合实验室实操经验，从样品处理、环境控制、人员操作等维度，详细阐述解决控制菌假阳性的具体策略，为提升检测准确性提供可落地参考。

优化样品前处理，消除抑菌与干扰

样品中的抑菌成分（如防腐剂、抗生素）是假阳性的间接诱因——若抑菌作用未中和，目标菌无法生长，外源杂菌易乘虚而入被误判。需根据样品性质选前处理方法：含季铵盐防腐剂的样品用卵磷脂+吐温80中和，含醛类的用硫代硫酸钠，中和剂浓度需预实验确定（0.5%-2%梯度，确保中和抑菌且不抑制目标菌）；难溶性样品用均质器（8000-10000rpm，1-2分钟）分散；水溶性样品用0.45μm膜过滤，滤后用50-100ml生理盐水冲洗除抑菌成分。

前处理需避免过度操作：均质时间过长会升温影响微生物活性，处理后30分钟内接种，防止微生物死亡或增殖。

严控培养基质量，避免固有污染

培养基质量直接影响结果，需选符合药典的商品化脱水培养基（如中国药典2020版1106通则），储存于≤25℃、≤60%湿度环境，开启后3个月内用完。制备时准确称量，用纯化水溶解，调pH至规定范围（如营养琼脂7.2±0.2）；灭菌参数要准：普通培养基121℃15分钟，含糖培养基115℃20分钟，避免破坏营养。

灭菌后立即冷却至45-50℃，24小时内使用；需储存的置于4℃冰箱，不超过一周。每批培养基做适用性检查：接种目标菌看生长，空白试验确认无杂菌，不合格则废弃。

强化环境控制，切断外源污染

控制菌检测需在B级背景的A级洁净区（生物安全柜）进行。A级区每月测1次环境：悬浮粒子≥0.5μm不超3520个/m³，≥5μm不超20个；沉降菌每皿≤1CFU。超标需停实验，查过滤器失效、人员带入等问题。

人员操作前换无菌服、消毒手；操作中不说话，手套每30分钟换一次；超净台提前30分钟开紫外，台面用75%乙醇擦；样品放台面中央，远离边缘（气流不稳定易引杂菌）。设备消毒：金属器具火焰灼烧（红热后冷却30秒），塑料耗材高压灭菌，生物安全柜内表面每周用500mg/L含氯液擦，过滤器每6个月验证。

排查试剂耗材，消除潜在隐患

稀释剂（生理盐水、磷酸盐缓冲液）用注射用水配，灭菌后做空白试验（10ml接种无生长）；一次性耗材选环氧乙烷灭菌的，查灭菌日期和包装，过期破损不用。

反复用的试剂（如中和剂）每次用前做空白；试剂瓶用铝箔密封，倒取时不污染；吸管用量液器，不用嘴吹吸。

规范对照试验，验证检测系统

同步做阳性、阴性、空白对照：阳性对照加10-100CFU目标菌，若未生长说明系统有问题（培养基不适、抑菌未中和）；阴性对照用无菌水，若生长说明外源污染；空白对照用未接种培养基，确认无杂菌。

对照异常则样品结果无效，需重测，不可省略对照。

提升操作规范，减少人为误差

新员工需3个月培训，考核无菌操作、接种技术等；老员工每半年复训。操作细节：接种环不碰容器壁，稀释时枪头深入液面，涂布棒用乙醇消毒后冷却再用。

记录要及时：样品编号、稀释倍数立即写原始记录，用钢笔，不改涂，修改划横线签名。

优化细节，避免交叉污染

分区操作：样品、阳性对照、阴性对照区分开；用一次性耗材，不重复用；处理完一个样品用75%乙醇擦台面。接种环灼烧彻底，不同样品重新烧；样品盖倒置，避免冷凝水滴入。