纺织品抗菌检测中抑菌环测试的操作步骤详解

抑菌环测试是纺织品抗菌性能评价的经典方法，通过观测细菌在含抗菌样品的培养基上生长受抑制的环形区域，直观反映抗菌效果。该方法因操作简便、结果可视化强，广泛应用于服装、家纺等纺织品检测。本文将拆解其操作步骤，涵盖样品准备、培养基制备、菌液接种、样品放置、培养观察等关键环节，为检测人员提供实操参考。

样品的预处理与裁剪

纺织品生产中残留的整理剂、污渍会干扰测试结果，需先按标准（如GB/T 20944.2-2007）预处理：用蒸馏水或0.1%中性洗涤剂浸泡15min，轻轻揉搓后冲洗3次，再于37℃恒温箱晾干（避免阳光直射破坏抗菌成分）。

预处理后的样品需裁剪成规格统一的试样，常用直径15mm的圆片（或边长15mm的正方形），用无菌 punches 器或剪刀裁剪，确保边缘平整无毛刺——毛刺会挂住菌液，导致局部菌浓度过高，影响抑菌环均匀性。每个样品制备3个平行样，平行样尺寸、形状需完全一致，减少实验误差。

培养基与试剂的制备

抑菌环测试常用营养琼脂培养基（NA），适合大多数测试菌种（如金黄色葡萄球菌、大肠杆菌）。制备时，按培养基说明书称量粉末（如1000mL水加33g NA），加入蒸馏水后加热搅拌至完全溶解，然后分装到三角瓶中，用棉塞封口，121℃高压灭菌15min。

灭菌后的培养基需冷却至45-50℃（手触瓶壁不烫手），避免温度过高杀死后续接种的细菌。同时准备磷酸盐缓冲液（PBS，pH7.2），用于稀释菌液和冲洗样品，PBS需提前灭菌（121℃、15min）备用。

菌液的制备与浓度调整

先复苏菌种：从-80℃冰箱取出目标菌种（如金黄色葡萄球菌ATCC 6538），用无菌接种环挑取少量菌苔，接种到10mL营养肉汤培养基中，37℃、180rpm振荡培养18-24h，使菌种恢复活性。

复苏后的菌液用比浊法调整浓度：取1mL菌液加9mL PBS稀释，与0.5麦氏比浊管（相当于1.5×10^8 CFU/mL）在黑色背景下对比，浊度一致即可。若用分光光度计，OD600值需在0.08-0.1之间（对应0.5麦氏比浊）。

最后制备工作菌液：将调整好的菌液按1:9比例用PBS稀释（1mL菌液加9mL PBS），得到1.5×10^7 CFU/mL的工作菌液——此浓度能保证接种后平板形成均匀菌苔，又不会因菌过多导致抑菌环模糊。

平板的制备与菌液接种

在超净工作台中，向每个无菌培养皿（直径90mm）倒入15-20mL冷却至45℃的培养基，转动培养皿使培养基均匀覆盖底部，静置30min待凝固（表面无流动性）。

用无菌棉拭子蘸取工作菌液，在试管壁挤压3次去掉多余液体，然后在平板表面均匀涂抹3次，每次旋转60度，最后沿边缘涂一圈。接种后平板需晾干5-10min，让菌液完全吸收——未晾干就放样品会导致样品浮起，影响抗菌成分释放。

样品的放置与密封

用无菌镊子（提前在酒精灯火焰上灼烧灭菌，冷却后使用）夹取预处理好的样品，放在平板中央，轻轻向下按压1-2秒，确保样品与培养基紧密接触（但不要压破培养基）。每个平板放1个样品，避免样品间抑菌作用互相干扰。

放置好样品后，用Parafilm膜密封平板边缘（或用无菌保鲜膜），防止培养过程中水分蒸发导致培养基干裂，同时避免杂菌污染。在平板底部用记号笔标记样品编号、菌种、日期，避免混淆。

恒温培养与抑菌环测量

将密封好的平板倒置（避免冷凝水滴落在培养基上），放入37℃恒温培养箱中培养16-24h——金黄色葡萄球菌培养18h，大肠杆菌培养24h（不同菌种生长速度不同）。

培养结束后取出平板，观察样品周围是否有透明的抑菌环（即细菌无法生长的区域）。用游标卡尺测量抑菌环直径（包括样品本身直径），取3个垂直方向的平均值（精确到0.1mm）。若抑菌环边缘不整齐，取最宽和最窄值的平均；若有微小菌落生长在抑菌环内，需判断是否为杂菌（对比阴性对照），杂菌需重新实验。

空白对照与结果有效性判断

实验需设置阴性对照和阳性对照：阴性对照用未处理的同种纺织品（不含抗菌剂），按相同步骤操作，阴性对照不应出现抑菌环（若出现，说明样品预处理不彻底或实验污染）；阳性对照用已知抗菌性能的标准样品（如含1%三氯生的纺织品），应出现清晰抑菌环（若未出现，说明菌液或培养基失效）。

平行样的抑菌环直径偏差需≤1mm，否则实验无效（需重新制备样品和菌液）。只有当对照符合要求、平行样偏差在允许范围内时，测试结果才有效。