生活饮用水中微生物指标cnas检测的流程详解

生活饮用水的微生物安全直接关系公众健康，CNAS（中国合格评定国家认可委员会）认可的检测流程凭借严格规范，成为结果准确性与权威性的核心保障。本文围绕生活饮用水微生物指标cnas检测全流程，从前期准备、样品采集到结果确认，逐环节解析CNAS要求，为检测机构提供可落地的操作指南。

CNAS检测前的准备工作

参与检测的人员需通过CNAS专项培训，掌握无菌操作与《微生物检测领域应用说明》要求，关键岗位需参与过国家级能力验证。

培养箱每年校准温度（±1℃内），灭菌锅每季度用生物指示剂验证灭菌效果，移液器每6个月校准（误差≤±2%）。

MUG培养基需接种大肠杆菌标准菌株，培养后能长出蓝色荧光菌落才算合格；生理盐水需过滤除菌并验证无菌性。

生物安全柜用75%乙醇消毒后开紫外灯30分钟，实验室温度控制在20-25℃、湿度40%-60%。

生活饮用水样品的采集与运输

采样用121℃灭菌15分钟的聚烯烃瓶，检查瓶身无裂纹、瓶盖密封良好。

水龙头采样前放水3-5分钟，待水流稳定后接取，避免瓶嘴接触水龙头；地表水在水面下10-15cm处采集。

总大肠菌群采500ml、细菌总数采100ml，样品装至瓶身90%满，减少空气残留。

用保温箱加冰袋保持4±2℃，24小时内送达；运输中避免倒置或震荡，破损、温度超标样品拒收并记录。

样品的实验室接收与登记

接收时检查标签（采样时间、地点、编号）、容器完整性与运输温度，信息不全或温度超标的样品拒收。

将样品信息与采样单逐一比对，确认一致后用“待检测”“正在检测”标签标识状态。

立即存入4℃冰箱，细菌总数6小时内、总大肠菌群24小时内完成检测。

需延迟检测的，经负责人批准并记录原因，确保样品新鲜度不影响结果。

微生物检测的前处理步骤

前处理在生物安全柜内进行，操作前用75%乙醇消毒双手与台面，柜内提前运行15分钟净化空气。

细菌总数做10倍系列稀释：1ml样品加9ml生理盐水，混匀后得到10⁻¹稀释液，依此类推。

总大肠菌群用滤膜法浓缩：500ml样品缓慢通过0.45μm无菌滤膜，过滤速度控制在50ml/min内。

使用无菌一次性吸头、镊子，滤膜转移至培养基时确保无气泡，避免交叉污染。

关键微生物指标的检测操作

总大肠菌群用滤膜法：将滤膜置于MUG培养基，36±1℃培养24±2小时，紫外灯下见蓝色荧光菌落为阳性。

粪大肠菌群需复核：将阳性滤膜转至EC培养基，44.5±0.5℃培养24±2小时，培养基有气泡为阳性。

细菌总数用平板计数法：取1ml稀释液涂布营养琼脂，36±1℃培养48±2小时，计数30-300 CFU的平板。

所有操作需符合GB/T 5750.12-2006《生活饮用水标准检验方法 微生物指标》要求。

培养与观察的规范要求

培养箱温度需恒定：总大肠菌群36±1℃、粪大肠菌群44.5±0.5℃，每天记录温度两次，偏差超±1℃需调整并重测。

严格按标准时间培养：总大肠菌群24小时、细菌总数48小时，不得提前终止或延长。

观察总大肠菌群时，需关闭实验室灯光，用波长365nm的紫外灯照射平板，避免自然光干扰荧光判断。

细菌总数观察需计数所有可见菌落，包括微小或色素菌落，有蔓延菌的平板需换稀释倍数重测。

结果的确认与废弃物处理

阳性结果需复核：总大肠菌群阳性样品需用备份样重测，或做吲哚、甲基红试验确认生化特征。

数据记录需包含样品编号、检测人员、设备编号、培养基批次、菌落数，不得涂改，修改需标注原因与修改人。

培养后的培养基平板用生物安全袋封装，高压灭菌（121℃15分钟）后作医疗废物处理。

阳性样品容器用含氯消毒液（有效氯500mg/L）浸泡30分钟，清洗后灭菌；实验室每周用紫外线灯照射30分钟，消毒记录归档备查。