污水排放检测中微生物指标的检测流程与标准

污水中存在的病原微生物（如大肠菌群、沙门氏菌、志贺氏菌等）是水传播疾病（如霍乱、细菌性痢疾）的主要传染源，其排放检测中的微生物指标检测是防控污染、保障水环境安全的核心环节。本文围绕污水排放检测中微生物指标的实际流程（样品采集、前处理、指标检测）及国家标准要求展开，系统说明如何规范完成检测，确保结果准确反映污水的微生物污染状况，为合规排放提供技术支撑。

污水排放检测中的核心微生物指标

污水排放检测的微生物指标分两类：指示菌与致病微生物。指示菌用于间接反映粪便污染程度，核心包括总大肠菌群、粪大肠菌群及细菌总数；致病微生物直接关联健康，主要有沙门氏菌、志贺氏菌等肠道致病菌。

总大肠菌群是传统粪便污染指示菌，其存在提示污水可能携带肠道病原菌（如轮状病毒）；粪大肠菌群（如大肠杆菌）更具特异性，仅来自温血动物肠道，能精准反映近期人类粪便污染，是判断即时健康风险的关键。

沙门氏菌可引发伤寒、急性胃肠炎，志贺氏菌导致细菌性痢疾，两者均为《污水综合排放标准》必检指标。细菌总数虽不直接指示病原体，但能反映污水微生物总体含量，辅助评估污染程度。

微生物检测样品的采集与保存

连续排放的污水需“时间比例混合采样”：每2小时采1次，共6次混合成综合样品；间歇排放的污水采高峰时段样品（如生产30分钟后），确保捕获高浓度污染物。

采样点选排放口流路中心，避开管道死角——死角样品易因微生物死亡或繁殖失去代表性。采样容器需无菌：玻璃容器121℃高压灭菌20分钟，聚乙烯容器用γ射线灭菌，采样前用待采污水冲3次，避免残留物质干扰。

样品采集后立即密封、贴标签（含时间、地点、编号），放入4℃冷藏箱运输，2小时内送检；若无法及时送检，保存不超过6小时——温度过高会导致微生物繁殖，过低抑制活性，均影响结果。

样品前处理的操作要点

前处理核心是“浓缩微生物+去除干扰”。低浓度样品（如处理后城镇污水）用滤膜法：100ml样品通过0.45μm滤膜，截留微生物后转移至培养基，提高检出率。

含悬浮物的污水（如造纸废水）需均质：样品与无菌生理盐水1:1混合，用拍击式均质器均质30秒，打破颗粒物释放微生物——未均质会导致微生物包裹在颗粒内，结果偏低。

含氯污水（如医院污水）需中和：10ml样品加90ml含0.1%硫代硫酸钠的生理盐水，中和余氯（避免杀死微生物）——未中和会出现假阴性结果。前处理后立即检测，放置超1小时需重新冷藏。

总大肠菌群与粪大肠菌群的检测流程

总大肠菌群常用多管发酵法：①初发酵：取10ml、1ml、0.1ml样品接种乳糖胆盐发酵管，37℃培养24小时，产酸产气为阳性；②平板分离：阳性管菌液接种伊红美蓝琼脂，37℃培养18-24小时，挑取紫黑色有金属光泽菌落；③复发酵：典型菌落接种乳糖发酵管，再次产酸产气则判定阳性。

滤膜法适合低浓度样品：100ml样品过滤膜后，放在MF-Endo琼脂平板，37℃培养24小时，计数红色有金属光泽菌落，结果为“CFU/100ml”。

粪大肠菌群检测流程类似，但培养温度提高到44.5℃——仅粪源大肠菌群能在高温下生长，精准区分近期污染与陈旧污染。

致病微生物的检测要点

沙门氏菌与志贺氏菌需“选择性增菌+生化鉴定”。第一步预增菌：50ml样品加450ml缓冲蛋白胨水，36℃培养8-18小时，恢复受损微生物活性；第二步选择性增菌：沙门氏菌用亚硒酸盐胱氨酸增菌液，志贺氏菌用GN增菌液，抑制杂菌生长；第三步平板分离：沙门氏菌接种SS琼脂（无色透明菌落、中心黑），志贺氏菌接种麦康凯琼脂（无色菌落）；第四步生化与血清学验证：通过硫化氢试验、抗血清凝集确认目标菌。

细菌总数的检测方法

细菌总数用平板计数法：①稀释：1ml污水加9ml生理盐水，制成10^-1到10^-6稀释液（未处理污水稀释至10^-5，处理后至10^-3）；②涂布：0.1ml稀释液涂营养琼脂平板，做2个平行；③培养：37℃倒置培养24-48小时；④计数：选30-300菌落的平板，平均值得“CFU/ml”结果。

注意：稀释需在超净台进行，涂布棒用乙醇灼烧冷却后使用，避免烫伤微生物；若出现蔓延菌落（如芽孢杆菌），需重新检测。

微生物检测的质量控制

空白实验：用无菌生理盐水代替样品，若阳性说明污染（容器未灭菌、培养基被污染），需重测；阳性对照：用标准菌株（如大肠杆菌ATCC25922）检测，若未出预期结果，说明试剂失效或操作错，需换试剂验证；平行样：2份相同样品同时检测，相对偏差≤10%，否则重新采样；人员需持证上岗，熟练无菌操作（酒精灯火焰旁接种，移液器吸头一次性使用）。

污水微生物检测的标准体系

我国污水微生物标准以《污水综合排放标准》（GB8978-1996）为基础，结合行业制定专项标准：GB8978-1996规定总大肠菌群一级标准1000个/L（车间口），二级5000个/L；《城镇污水处理厂污染物排放标准》（GB18918-2002）一级A标准总大肠菌群≤1000个/L（排入地表水Ⅱ类）；《医疗机构水污染物排放标准》（GB18466-2005）要求粪大肠菌群≤500个/L（直接排放）。检测需根据排放去向选标准，如排入饮用水源地执行GB18918-2002一级A。

结果判定与报告规范

总大肠菌群与粪大肠菌群用MPN法（如3管阳性对应35MPN/100ml）或滤膜法（CFU/100ml）；沙门氏菌、志贺氏菌为定性结果（检出/未检出，需注检测体积）；细菌总数用CFU/ml（保留两位有效数字，如1.2×10^4）。

报告需含：样品编号、采样时间/地点、检测指标、方法、结果（单位）、标准依据、判定结论（如“总大肠菌群符合GB18918-2002一级A标准”）。报告需签字盖章，超标需通知排污单位整改（如增加消毒剂量）。