洁净室洁净度检测中空气悬浮粒子和沉降菌浓度的检测方法与要求

洁净室是医药、电子、食品等行业保障产品质量的核心环境，其洁净度由空气悬浮粒子（0.5μm、5μm粒径颗粒）与沉降菌浓度共同评定——前者反映颗粒物污染水平，后者体现微生物污染状况。掌握两项指标的检测方法与要求，是洁净室合规运行的基础。本文结合GB/T 16292-2010、GB/T 16294-2010等标准，解析检测细节。

空气悬浮粒子检测的抽样方案设计

空气悬浮粒子抽样需按洁净度等级与面积确定采样点数量：面积≤10㎡设2-3个点，＞10㎡每增加10㎡增设1个点，最少不低于2个点。例如25㎡的C级洁净区需设4个点（10㎡3个+额外15㎡1个）。

每个采样点的采样次数匹配洁净度等级：A级（如无菌灌装区）每个点采3次，B/C/D级采2次，通过多次采样减少偶然误差。采样量需满足：0.5μm粒子最小采样量2.83L，5μm粒子8.5L，或按粒子计数器额定值执行。

采样点分布遵循“均匀、避干扰”原则：距墙面≥0.5m，避开送风口（气流直射导致粒子浓度偏低）、回风口（粒子浓度偏高）；高度与操作面一致（1.0-1.5m，如医药行业灌装台高度约1.2m）。

检测状态需明确——静态（洁净室运行无人员）或动态（人员正常操作），两者限值不同：如B级动态0.5μm粒子限值（83200个/m³）比静态（35200个/m³）宽松，更贴合生产实际。

空气悬浮粒子的采样操作要点

采样前准备：洁净室需提前运行30分钟，使气流稳定（单向流速度0.36-0.54m/s）；粒子计数器在室内平衡30分钟，避免温度差导致采样口结露（结露会粘附粒子，结果偏低）。

采样时，计数器采样口朝上，与气流方向平行（单向流）或垂直（非单向流），采样速度匹配洁净室气流（单向流0.3-0.5m/s）。从洁净室最内侧点开始采样，逐步向外，避免带入外部污染。

采样人员需穿洁净服、戴手套，站在采样点下风向，避免身体遮挡气流。采样后立即关闭计数器采样口，防止外部空气进入。

记录环境参数：温度18-26℃、湿度45%-65%、压差≥10Pa（洁净室与非洁净区），参数超标需重新检测。

空气悬浮粒子的计数设备要求

需用激光粒子计数器，核心要求是“双粒径同时计数”——能准确测量0.5μm和5μm粒径，计数效率：0.5μm粒子≥50%、5μm粒子≥90%；流量误差≤±5%，确保采样量一致。

设备每年需由第三方计量机构校准1次，校准项目包括计数效率、流量、粒径分辨率，校准报告留存3年，作为结果有效的依据。

日常维护：进气口滤膜每周检查，破损或积尘及时更换；采样管每月用无水乙醇冲洗，晾干后使用，避免管内残留粒子交叉污染；外壳用75%乙醇擦拭，每周1次。

高洁净度区域（如A级）需用无油真空泵计数器，防止油雾粒子污染环境，影响检测结果。

空气悬浮粒子的结果判定规则

结果计算：A级每个点3次采样取均值，需全部≤限值（如动态0.5μm≤3520个/m³、5μm≤20个/m³）；B/C/D级取全区所有点的均值，均值≤限值即合格。

若某点结果超标，需在同一位置增加3次采样（共5次），取均值重新判定。仍超标则排查问题：如高效过滤器泄漏（用计数器扫描滤器边框，粒子浓度骤升即为泄漏）、回风口堵塞（导致粒子堆积）。

记录需完整：采样日期、点位置、计数器型号与校准日期、环境参数、每个点的粒子数，用不可擦除笔或加密电子记录，保存3年以上。

动态检测结果需与静态对比，若动态结果远超静态，需优化人员操作（如减少走动）或设备清洁频率。

沉降菌检测的培养基选择与制备

沉降菌检测用培养基捕获空气中的微生物，常用两种培养基：胰酪大豆胨琼脂（TSA）测细菌，支持革兰氏阳性菌、阴性菌生长；沙氏葡萄糖琼脂（SDA）测真菌（霉菌、酵母菌），低pH值（5.6）抑制细菌、促进真菌繁殖。

培养基质量要求：无菌（每批取10ml培养，35℃48小时无菌落）、凝固力好（倾斜45°不流动，避免暴露时溢出）、pH准确（TSA7.2±0.2，过酸过碱抑制菌生长）。

制备步骤：按说明书称量（TSA每升水加40g）→加热溶解→高压灭菌（121℃15min）→冷却倒皿（每皿15-20ml）。

培养基冷藏（2-8℃）保存，有效期3个月，开封后1周内用完，防止干燥——干燥培养基无法支持微生物生长。

沉降菌的采样点布置原则

采样点数量与洁净度等级挂钩：A级每个操作点设1个（如灌装机上方）；B级每10㎡设1个，最少2个；C级每20㎡设1个；D级每30㎡设1个。

采样点分布与悬浮粒子一致：距墙≥0.5m，避开送/回风口，高度1.0-1.5m（操作面）。若有设备（如封盖机），需在设备周围设点，因设备表面易滋生微生物。

点需编号标记（如S1、S2），记录位置（如“S1：距北墙1.2m，西墙2.5m”），确保每次检测点一致，便于跟踪微生物变化趋势。

检测状态分静态/动态，动态检测更反映生产中的微生物扩散（如人员操作会使菌浓度升高）。

沉降菌的采样操作与培养

采样前，平皿提前1小时带入洁净室，适应环境温度，避免冷凝水（冷凝水会使菌扩散，难以计数）。

采样时，打开平皿盖，扣在平皿旁边（防止灰尘落入），暴露时间：A级1小时、B/C级2小时、D级4小时——时间过长会干燥，过短捕获菌少。

暴露后立即盖盖，用parafilm密封（防止水分蒸发），标记点编号，尽快送实验室（运输中避免震动，防止菌落扩散）。

培养条件：TSA培养基35±2℃培养48小时（细菌），SDA培养基25±2℃培养72小时（真菌），培养箱温度误差≤±1℃，否则影响菌生长速度（如低温导致菌落过小）。

沉降菌的结果有效性要求

结果有效性需满足：采样平皿无破损、暴露时间准确、培养温度合规——若平皿有裂纹，或暴露时间少10分钟，结果无效。

计数时用菌落计数器或肉眼全皿计数，包括所有可见菌落（无论大小），超过100个的平皿标注“＞100CFU/皿”（菌落重叠无法准确计数）；丝状真菌需单独描述（如“白色丝状，直径5mm”），真菌污染风险更高。

限值要求：A级动态≤1CFU/皿，B级≤5CFU/皿，C级≤10CFU/皿，D级≤15CFU/皿。若某点超标，需重新采样，排查原因：如人员未戴手套、设备未消毒、过滤器泄漏。

记录需关联悬浮粒子数据——若某点悬浮粒子浓度高，沉降菌浓度也高，说明该区域颗粒物携带微生物，需加强清洁（如增加消毒频率）。