芝麻微生物检测的常用方法有哪些及其操作步骤？

芝麻作为一种常见且重要的油料作物及食品原料，其质量安全至关重要。而微生物检测是保障芝麻品质的关键环节。了解芝麻微生物检测的常用方法及其具体操作步骤，能有效帮助相关从业者准确把控芝麻的微生物状况，确保其符合食用及加工等方面的要求。下面将详细介绍芝麻微生物检测的常用方法以及对应的操作步骤。

一、菌落总数检测方法及操作步骤

菌落总数是衡量芝麻受微生物污染程度的一个重要指标。其检测方法主要依据国家标准进行。

操作步骤如下：

首先，样品采集与制备。选取有代表性的芝麻样品，用无菌采样工具采集适量芝麻，放入无菌均质袋中。加入适量无菌生理盐水，以一定比例进行稀释，制成均匀的样品匀液。

接着，进行平板倾注。将制备好的样品匀液吸取适量，分别注入到已经灭菌并冷却至适宜温度的营养琼脂平板中，每个平板注入的量要准确且均匀，然后立即将平板进行轻轻晃动，使样品匀液与琼脂培养基充分混合。

之后，进行培养。将倾注好的平板倒置放入恒温培养箱中，在适宜的温度（一般为36℃±1℃）和时间（通常为48±2小时）下进行培养。在培养过程中要确保培养箱的温度和湿度等环境条件稳定。

最后，菌落计数。培养结束后，取出平板，在合适的光照条件下，用肉眼或借助菌落计数器对平板上生长的菌落进行计数，按照相应的计数规则得出每克（或每毫升）芝麻样品中的菌落总数。

二、大肠菌群检测方法及操作步骤

大肠菌群的检测对于评估芝麻的卫生状况意义重大，其常用检测方法有多管发酵法等。

具体操作如下：

第一步，样品处理同菌落总数检测类似，先采集并制备好芝麻样品匀液。

第二步，初发酵试验。将样品匀液按照不同的稀释度分别接种到乳糖胆盐发酵管内，每管接种的量要准确，然后放入恒温培养箱中，在适宜温度（一般为36℃±1℃）下培养一定时间（通常为24±2小时）。观察发酵管内的产气情况，若有气体产生则可能存在大肠菌群，需进行下一步试验。

第三步，复发酵试验。从初发酵有产气现象的发酵管中取适量培养液，转接到伊红美蓝琼脂平板或其他适宜的鉴别培养基平板上，进行划线分离培养，在适宜温度（如36℃±1℃）下培养18 - 24小时。培养结束后，观察平板上的菌落形态特征等，若出现典型的大肠菌群菌落特征（如紫黑色、有金属光泽等），则初步判定存在大肠菌群。

第四步，进行证实试验。挑取平板上疑似大肠菌群的菌落，接种到乳糖发酵管中，再次观察产气情况，若产气则可证实样品中存在大肠菌群，最后根据相关接种量和稀释度等情况计算出每克（或每毫升）芝麻样品中的大肠菌群最可能数（MPN）。

三、霉菌和酵母菌检测方法及操作步骤

霉菌和酵母菌的检测能反映芝麻在储存等过程中可能受到的真菌污染情况。常用的检测方法如下。

操作流程：

样品准备阶段，同样要采集具有代表性的芝麻样品，制成均匀的样品匀液，可采用无菌水进行稀释等操作。

然后进行平板倾注培养。吸取适量样品匀液注入到已经灭菌并冷却至合适温度的马铃薯葡萄糖琼脂（PDA）平板或孟加拉红琼脂平板等适宜真菌生长的培养基平板上，轻轻晃动平板使匀液与培养基充分混合。

接着将平板倒置放入恒温培养箱中，对于霉菌培养温度一般为28℃左右，培养时间通常为5 - 7天；对于酵母菌培养温度可在25℃ - 28℃之间，培养时间一般为2 - 3天。不同的真菌种类培养条件略有差异，要严格按照规定执行。

最后，在培养结束后，取出平板，在合适的照明条件下，用肉眼或借助放大镜等工具对平板上生长的霉菌和酵母菌菌落进行计数，从而得出每克（或每毫升）芝麻样品中的霉菌和酵母菌数量。

四、金黄色葡萄球菌检测方法及操作步骤

金黄色葡萄球菌是一种常见的食源致病菌，对芝麻进行该菌的检测十分必要。其检测方法主要有以下步骤。

首先，样品处理环节，采集芝麻样品后，制成合适的样品匀液，可通过在无菌条件下加入适量无菌生理盐水等方式进行。

然后进行增菌培养。将样品匀液接种到7.5%氯化钠肉汤培养基中，放入恒温培养箱中，在适宜温度（一般为36℃±1℃）下培养18 - 24小时，使可能存在的金黄色葡萄球菌得到增殖。

接着进行分离培养。从增菌培养后的肉汤培养基中取适量培养液，划线接种到血琼脂平板或其他适宜的鉴别培养基平板上，在适宜温度（如36℃±1℃）下培养18 - 24小时。培养结束后，观察平板上的菌落形态特征，金黄色葡萄球菌菌落一般呈现为金黄色、圆形、凸起、边缘整齐等特点。

最后，进行鉴定试验。挑取平板上疑似金黄色葡萄球菌的菌落，进行血浆凝固酶试验等相关鉴定试验，若试验结果呈阳性，则可证实样品中存在金黄色葡萄球菌，进而得出每克（或每毫升）芝麻样品中的金黄色葡萄球菌含量情况。

五、沙门氏菌检测方法及操作步骤

沙门氏菌也是重要的食源致病菌，芝麻检测中不容忽视。其检测流程较为复杂，主要如下。

第一步，样品采集与处理。选取合适的芝麻样品，制成均匀的样品匀液，这一步操作要确保无菌。

第二步，预增菌。将样品匀液接种到缓冲蛋白胨水培养基中，放入恒温培养箱中，在适宜温度（一般为36℃±1℃）下培养18 - 24小时，使沙门氏菌从受损伤状态恢复到可培养状态。

第三步，增菌培养。从预增菌后的培养液中取适量，接种到四硫磺酸钠煌绿（TTB）肉汤培养基或亚硒酸盐胱氨酸（SC）肉汤培养基等适宜沙门氏菌生长的培养基中，在适宜温度（如36℃±1℃）下培养18 - 24小时，进一步促进沙门氏菌的增殖。

第四步，分离培养。从增菌培养后的肉汤培养基中取适量培养液，划线接种到木糖赖氨酸脱氧胆酸盐（XLD）琼脂平板或其他适宜的鉴别培养基平板上，在适宜温度（如36℃±1℃）下培养18 - 24小时。培养结束后，观察平板上的菌落形态特征，沙门氏菌菌落一般呈现为无色透明、圆形、凸起、边缘整齐等特点。

第五步，鉴定试验。挑取平板上疑似沙门氏菌的菌落，进行生化鉴定试验等相关鉴定试验，若试验结果呈阳性，则可证实样品中存在沙门氏菌，从而得出每克（或每毫升）芝麻样品中的沙门氏菌含量情况。

六、志贺氏菌检测方法及操作步骤

志贺氏菌同样是食源致病菌，在芝麻检测中有其重要性。其检测方法及步骤如下。

首先，样品采集与处理方式与其他微生物检测类似，要采集有代表性的芝麻样品并制成均匀的样品匀液。

然后进行预增菌。将样品匀液接种到GN肉汤培养基中，放入恒温培养箱中，在适宜温度（一般为36℃±1℃）下培养18 - 24小时，使志贺氏菌从受损伤状态恢复到可培养状态。

接着进行增菌培养。从预增菌后的培养液中取适量，接种到麦康凯琼脂培养基或其他适宜的鉴别培养基中，在适宜温度（如36℃±1℃）下培养18 - 24小时，进一步促进志贺氏菌的增殖。

第四步，分离培养。从增菌培养后的琼脂培养基中取适量培养液，划线接种到SS琼脂平板或其他适宜的鉴别培养基平板上，在适宜温度（如36℃±1℃）下培养18 - 24小时。培养结束后，观察平板上的菌落形态特征，志贺氏菌菌落一般呈现为无色透明、圆形、凸起、边缘整齐等特点。

最后，进行鉴定试验。挑取平板上疑似志贺氏菌的菌落，进行生化鉴定试验等相关鉴定试验，若试验结果呈阳性，则可证实样品中存在志贺氏菌，进而得出每克（或每毫升）芝麻样品中的志贺氏菌含量情况。

七、单核细胞增生李斯特氏菌检测方法及操作步骤

单核细胞增生李斯特氏菌是一种能引起严重食源性疾病的病原菌，对芝麻进行该菌的检测很重要。其检测方法如下。

首先，样品采集与处理。选取合适的芝麻样品，制成均匀的样品匀液，操作过程要确保无菌。

然后进行增菌培养。将样品匀液接种到李斯特氏菌增菌肉汤（LEB）培养基中，放入恒温培养箱中，在适宜温度（一般为36℃±1℃）下培养18 - 24小时，使可能存在的单核细胞增生李斯特氏菌得到增殖。

接着进行分离培养。从增菌培养后的肉汤培养基中取适量培养液，划线接种到李斯特氏菌选择培养基（PALCAM）平板或其他适宜的鉴别培养基平板上，在适宜温度（如36℃±1℃）下培养18 - 24小时。培养结束后，观察平板上的菌落形态特征，单核细胞增生李斯特氏菌菌落一般呈现为蓝色、圆形、凸起、边缘整齐等特点。

最后，进行鉴定试验。挑取平板上疑似单核细胞增生李斯特氏菌的菌落，进行生化鉴定试验等相关鉴定试验，若试验结果呈阳性，则可证实样品中存在单核细胞增生李斯特氏菌，进而得出每克（或每毫升）芝麻样品中的单核细胞增生李斯特氏菌含量情况。