水质检测中心对生活饮用水中微生物指标的常规检测流程与结果判定依据

生活饮用水中的微生物指标是公众健康的“隐形防线”——菌落总数反映水质受微生物污染的总体水平，总大肠菌群、耐热大肠菌群等则直接提示粪便污染风险（可能携带沙门氏菌、志贺氏菌等致病菌，引发腹泻、伤寒等疾病）。水质检测中心的常规微生物检测通过标准化流程（采样、预处理、指标检测、结果判定），将抽象的“风险”转化为可量化的数值，其结果直接服务于饮水安全管控，是保障居民健康的关键环节。

生活饮用水微生物检测的核心指标选择逻辑

水质检测中心选择的微生物指标遵循“指示菌”原理：用易培养、易识别的微生物间接反映致病微生物的存在风险。例如，菌落总数是“一般性污染指标”，涵盖水中所有可在营养琼脂上生长的需氧/兼性厌氧细菌，数值越高说明水质受有机物或杂菌污染越严重；总大肠菌群是“粪便污染指示菌”，因这类菌主要存在于人类及温血动物粪便中，若检出则提示水可能被粪便污染，存在致病微生物隐患。

在此基础上，耐热大肠菌群（能在44.5℃高温下生长）和大肠埃希氏菌（总大肠菌群的典型种）被纳入常规检测——前者更反映“近期粪便污染”（环境中的大肠菌群无法在高温下存活），后者则是“人类粪便污染的特异性标识”。这四个指标共同构成“分层预警体系”，从“有没有污染”到“污染来源”逐步聚焦，覆盖生活饮用水的主要微生物风险。

指标选择也兼顾检测可行性：所有指标的检测方法都已纳入国标（GB 4789系列），无需复杂设备，适合常规实验室开展；同时，指标的限值（如菌落总数≤100CFU/mL）经过长期流行病学验证，能有效平衡“安全”与“检测成本”。

样品采集与运输的标准化操作要点

样品采集是检测的“第一步防线”，需严格规避污染。首先是容器要求：必须使用经121℃高压灭菌20分钟的玻璃瓶或聚乙烯塑料瓶（不能用未经灭菌的容器，否则会引入杂菌），且容器需无抑菌成分（如某些塑料瓶含杀菌剂，会抑制微生物生长）。

采样方法需“去干扰”：对于自来水或集中供水末梢水，需打开水龙头放水3-5分钟（排尽管道内停滞水，避免管道内壁微生物污染样品）；对于井水等分散式供水，需用无菌桶采集水面下10-20cm的水（避免表层浮渣或底部沉积物干扰）。采样量需匹配指标：菌落总数需100mL，总大肠菌群需500mL，确保后续检测有足够样品量。

运输环节需“保活性”：样品采集后立即放入4℃冷藏箱（不能结冰，否则破坏微生物细胞），24小时内送达实验室。若运输时间超过24小时，需在采样容器中预先加入10%硫代硫酸钠（每100mL水样加0.1mL）——消除余氯对微生物的抑制作用。同时，采样记录需完整：包括地点、时间、水温、pH值、采样人，这些信息将作为结果异常时的溯源依据（如水温过高可能导致菌落总数偏高）。

样品预处理的关键步骤与污染防控

样品送达实验室后，预处理的核心是“均匀样品、减少干扰”。首先是摇匀：将样品瓶轻轻旋转摇匀（不能剧烈振荡，避免破坏微生物细胞），确保微生物在样品中分布均匀——若水样浑浊，摇匀能避免因微生物聚集导致的计数误差。

稀释是菌落总数检测的必要步骤：若预判水样污染较重（如管网末梢水因管道老化可能污染），需用无菌生理盐水做梯度稀释（10倍、100倍、1000倍），确保后续培养的平板菌落数在30-300CFU之间（国标规定的有效计数范围）。稀释时需注意：移液管需经高压灭菌，每换一个稀释度需换一支移液管，避免交叉污染。

预处理全程需无菌操作：所有接触样品的器材（移液管、培养皿）需灭菌，操作在超净工作台中进行（提前用紫外线照射30分钟灭菌），操作人员穿无菌服、戴手套——若移液管接触到桌面，需立即更换，否则会引入杂菌，导致菌落总数结果偏高。

此外，含余氯的水样（如自来水）需加硫代硫酸钠除氯：每100mL水样加0.1mL 10%硫代硫酸钠，避免余氯抑制微生物生长，确保检测结果准确。

菌落总数的平板计数法流程与细节控制

菌落总数采用平板计数法（GB 4789.2-2016），流程分为“稀释-倾注-培养-计数”四步。稀释环节：取1mL稀释后的水样（如10^-1、10^-2稀释度），注入无菌培养皿；倾注环节：将46℃左右的营养琼脂（温度不能太高，否则烫死微生物；太低则琼脂凝固）倒入培养皿，每皿约15mL，迅速转动培养皿使水样与琼脂混合均匀（避免气泡或溢出）。

培养环节需严格控温：将培养皿倒置（避免冷凝水掉落在菌落上导致扩散），放入36℃±1℃恒温箱培养48小时±2小时。倒置是关键细节——若正放，冷凝水会使菌落融合，无法准确计数。

计数时需选择30-300CFU的平板：若所有稀释度平板菌落数都超过300，取最低稀释度计数（如10^-2稀释度有350个菌落，按350×100=35000CFU/mL计算）；若都低于30，取最高稀释度计数（如10^-1稀释度有25个菌落，按25×10=250CFU/mL计算）。计数时用菌落计数器，避免漏计/重复计数，同时记录菌落形态（如颜色、大小）——若有黏液状或颜色异常的菌落，需备注说明（可能是杂菌污染）。

总大肠菌群的多管发酵法检测流程

总大肠菌群采用多管发酵法（GB 4789.3-2016），核心是“初发酵-复发酵-MPN计数”。初发酵：将乳糖蛋白胨培养液分装到无菌试管（每管10mL），加入水样（如5管10mL、5管1mL、5管0.1mL），36℃培养24小时±2小时——若试管产酸（培养液由紫变黄）产气（杜氏小管有气泡），则为初发酵阳性；若24小时无变化，继续培养至48小时，仍无反应则为阴性。

复发酵是确认步骤：将初发酵阳性的培养液接种到伊红美蓝琼脂平板，36℃培养18-24小时——总大肠菌群的菌落呈紫黑色（有金属光泽）或淡紫色（中心较深）。挑取可疑菌落接种到乳糖蛋白胨培养液，再次培养24小时，若产酸产气则为复发酵阳性。

MPN计数是结果统计：根据阳性管数查《最可能数（MPN）表》。例如，5管10mL、5管1mL、5管0.1mL的阳性管数为3、2、1，查MPN表得每100mL水样的总大肠菌群MPN值为15——MPN是统计值，代表“最可能的细菌数量”，虽非精确值，但符合生活饮用水的检测要求。

耐热大肠菌群与大肠埃希氏菌的针对性检测

耐热大肠菌群的检测更聚焦“近期粪便污染”：采用EC肉汤（伊红美蓝肉汤），培养温度调整为44.5℃±0.5℃（高温下仅耐热大肠菌群能生长）。初发酵时，将水样接种到EC肉汤，44.5℃培养24小时±2小时——若产酸产气则为阳性，无需复发酵（EC肉汤对耐热大肠菌群有特异性）。

大肠埃希氏菌（E.coli）是“人类粪便污染的金标准”，检测方法有两种：一是平板计数法，用伊红美蓝琼脂培养后，挑取金属光泽菌落做IMViC试验（靛基质+、甲基红+、V-P-、柠檬酸盐-，即“++--”）；二是荧光抗体法，用荧光标记的抗E.coli抗体与样品结合，在荧光显微镜下观察——若有荧光则为阳性，更快速适合批量检测。

这两个指标的检测是总大肠菌群的“补充验证”：若总大肠菌群阳性但耐热大肠菌群阴性，说明污染可能来自环境（如土壤中的大肠菌群）；若两者都阳性，则提示“近期人类粪便污染”，需立即启动管控措施（如加大消毒剂量）。

结果判定的国标依据与实操细节

结果判定严格遵循《生活饮用水卫生标准》（GB 5749-2022）：菌落总数≤100CFU/mL；总大肠菌群、耐热大肠菌群、大肠埃希氏菌“每100mL水样不得检出”（即按国标方法检测无阳性结果）。这里的“不得检出”是“方法学上的未检出”——若检出，则说明水质不符合标准，需立即通知供水单位整改。

判定时需注意“平行样”与“空白样”：平行样需全部符合限值（如两个平行样的菌落总数分别为80CFU/mL和90CFU/mL，均合格；若一个120CFU/mL、一个80CFU/mL，则需复检）；空白样（用无菌水代替水样做同样检测）需无阳性结果——若空白样有菌落，说明检测过程中存在杂菌污染，所有样品结果无效，需重新检测。

异常结果需复检：若某水样菌落总数为150CFU/mL（超标），需重新采样检测——若复检仍超标，则判定为不合格；若复检合格，可能是第一次采样时的偶然污染（如采样容器未灭菌彻底）。复检需采用同样方法和条件，确保结果可比性。

最后，结果报告需包含“全链条信息”：采样地点、时间、检测方法、结果、判定依据、授权签字人——这些信息不仅是数据的“溯源凭证”，也是卫生监督部门处置不合格水质的“法律依据”，确保检测结果的真实性与合法性。